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名称标记定量蛋白质组(iTRAQ和TMT)点击预约

一、实验简介

iTRAQ和TMT是目前运用最广泛的两种标记定量蛋白质组技术,分别通过与氨基酸末端氨基以及赖氨酸残基的游离氨基结合,实现对多肽的标记,并通过不同分子量的试剂对不同来源样品进行标记的方式实现不同样品间蛋白质组比较的目标。以iTRAQ试剂为例,该试剂结构由指示基团、中性平衡基团和反应基团三部分组成。不同指示基团及其相对应平衡基团的质量和都相同,而反应基团能与赖氨酸ε氨基和所有肽链的氨基末端连接,可标记所有氨基酸。不同标记试剂与来源于不同样品胰酶消化后的肽段结合,经过色谱分离,并通过一级质谱和二级质谱。平衡基团在二级质谱时发生中性丢失,而报告基团在二级质谱低质量区域产生多个报告离子,其信号强度分别代表该标记样品的表达量,根据报告离子的峰面积计算同一蛋白质同一肽段在不同样品间的比值,从而实现蛋白的相对和绝对定量。

     技术流程如下:

iTRAQ和TMT分析特点

1    通量高

可以同时进行8个样品(iTRAQ)或10个样品(TMT)的分离鉴定和定量,提高了实验通量,可以进行多个时间点蛋白质组的动态监测

2    重复性好

来源不同的样品可以同时进行色谱分离和质谱鉴定,大大增强实验的重复性,最低可以检测到不同样品间5%的蛋白差异变化

3    分辨率高、定量准确

AB SCIEX公司的TripleTOF 5600系统和Thermo公司的Q-Exactive系统是世界上极少数具有准确质量数与高分辨率进行同时定量和定性分析的LC-MSMS系统。最先进的仪器再配上iTRAQ试剂和TMT试剂本身基于报告离子的定量原理和高达99%的蛋白标记效率,使得鉴定到的蛋白数量更多,同时也保证了结果的可靠性

4    鉴定结果可靠、蛋白检测范围广

二级质谱可以产生很好的y、b离子系列,蛋白序列覆盖率提高,鉴定结果更可靠,同时一个蛋白质有多个肽段被鉴定,进一步提高了定量的准确性。此外,iTRAQ和TMT实验在肽段水平进行蛋白分离和鉴定,大大提高膜蛋白等难溶性蛋白的溶解性,扩大蛋白检测范围。

二、服务列表


项目

价格

周期

标记定量蛋白质组(iTRAQTMT

面议,若实验不成功,不收取费用

1-2





三、服务流程

1. 按规定要求接受样品;

2. 蛋白样品制备;

3. 样品及实验预判;

4. 蛋白还原烷基化;

5. 不同的蛋白质样品酶解(通常为胰蛋白酶Trypsin);

6. 肽段标记后,等量混合;

7. SCX分级;

8. LC-MS/MS分析;

9. 数据库检索;

10.定性定量蛋白组学结果,相关生物信息学分析;

11.分析报告交付。

四、客户提供

样品要求


样品类型

样品要求(/组样品)

蛋白质提取物

浓度 >1μg/μL,蛋白质总量 >1000μg

细胞样品

细胞量>107或细胞沉淀不少于50 μL

组织样品

动物组织湿重>200mg;植物鲜嫩组织>1000mg

菌体样品

菌体沉淀不少于100 mg或者体积不少于100 μL

体液样品

血清体积>500μL

培养基上清液

浓缩后的体积不少于10 mL

寄送标准

1.寄送温度

a)   胶条样品:冰袋环境;

b)   组织、菌体、细胞沉淀、血清、培养基上清和蛋白提取液:样品收集好后立即置于液氮中冷冻5 min,-80℃保存,所有样品收集好后干冰环境寄送;

c)   细胞:冻存细胞干冰寄送;培养中的细胞需保证状态良好,培养瓶中装满培养基,常温寄送;

2.寄送样品时附上填写完整的纸质版样品信息单(务必包含样品物种拉丁名及数据库、样品标识名称,管数,分组对比信息)。

3.样品标记清晰明确,与样品信息单中保持一致。

五、交付内容

实验报告一份,含具体实验流程及蛋白质组鉴定及定量结果(生物信息学分析),

生物信息学分析内容包括:
标记定量:包括定量信息统计、蛋白质定量结果及肽段定量统计;
功能注释:包括GO注释、COG注释和Pathway代谢通路注释;
差异蛋白的富集分析:包括差异蛋白的GO富集分析和差异蛋白的Pathway富集分析

原始数据和电子版实验报告。纸质版实验报告可另外索取。

六、询价与订购

    为了能够准确高效地为您提供报价,请您在阅读后及时电话联系我们公司,我们将第一时间为您服务。

申请服务方式:预约

收费标准:来电咨询或面议

联系电话:0571-86629277


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