一、实验简介
定量蛋白质组学(Quantitative Proteomics)是对一个基因组表达的全部蛋白质或一个复杂混合体系内所有蛋白质进行精确鉴定和定量。可用于筛选和寻找任何因素引起的样本之间的差异表达蛋白,结合生物信息学揭示细胞生理病理功能,同时也可对某些关键蛋白进行定性和定量分析。
对一个特定时间、特定突变体、特定环境变化条件下进行细胞或组织全蛋白质的鉴定是生物学中常见问题。以质谱为基础的定量蛋白质组学,主要可以分成两类,第一是稳定同位素标记的定量蛋白质组学,比如SILAC 和iTRAQ;另一类是非标记的定量蛋白质组学技术。蛋白质非标记技术(Label free)克服了传统的同位素标记的缺点,即过高的样品浓度, 复杂的实验方案及价格过高的原料等,该方法具有速度更快,更简洁及更简明的结果等优点,同时具有较好的定量准确性和可信性。
技术特点:
(1)对液相色谱串联质谱的稳定性和重复性要求较高
(2)无需昂贵的同位素标签做内部标准,实验耗费低
(3)对样本的操作也最少,从而使其最接近原始状态,并且不受样品条件的限制,克服了标记定量技术在对多个样本进行定量方面的缺陷。
技术流程如下:
图:label-free定量蛋白质组技术流程
二、服务列表
价格 | 面议,若实验不成功,不收取费用 | 1-2周 |
三、服务流程
1.按规定要求接受样品
2.蛋白样品制备
3.样品及实验预判;
4.蛋白还原烷基化;
5.蛋白酶解(通常为胰蛋白酶Trypsin);
6. HPLC分级,获得多组分;
8. LC-MS/MS分析;
9. 数据库检索;
10.定性定量蛋白组学结果,相关生物信息学分析;
11.分析报告交付。
注释:“样品及实验预判”包括定量、SDS-PAGE测试、酶解和质谱分析,对样品质量及样品之间的平行性进行初步判断。
四、客户提供
样品要求
样品类型 | 样品要求(/组样品) |
蛋白质提取物 | 浓度 >1μg/μL,蛋白质总量 >1000μg |
细胞样品 | 细胞量>107或细胞沉淀不少于50 μL |
组织样品 | 动物组织湿重>200mg;植物鲜嫩组织>1000mg |
菌体样品 | 菌体沉淀不少于100 mg或者体积不少于100 μL |
体液样品 | 血清体积>500μL |
培养基上清液 | 浓缩后的体积不少于10 mL |
寄送标准
1.寄送温度
a) 胶条样品:冰袋环境;
b) 组织、菌体、细胞沉淀、血清、培养基上清和蛋白提取液:样品收集好后立即置于液氮中冷冻5 min,-80℃保存,所有样品收集好后干冰环境寄送;
c) 细胞:冻存细胞干冰寄送;培养中的细胞需保证状态良好,培养瓶中装满培养基,常温寄送;
2.寄送样品时附上填写完整的纸质版样品信息单(务必包含样品物种拉丁名及数据库、样品标识名称,管数,分组对比信息)。
3.样品标记清晰明确,与样品信息单中保持一致。
五、交付内容
实验报告一份,含具体实验流程及蛋白质组鉴定及定量结果(生物信息学分析),
生物信息学分析内容包括:
标记定量:包括定量信息统计、蛋白质定量结果及肽段定量统计;
功能注释:包括GO注释、COG注释和Pathway代谢通路注释;
差异蛋白的富集分析:包括差异蛋白的GO富集分析和差异蛋白的Pathway富集分析
原始数据和电子版实验报告。纸质版实验报告可另外索取。
六、询价与订购
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